Биология и экология

Ход работы

При одномерной хроматографии 1 мл полученной вытяжки наносят полосой длиной 12 см на расстоянии 2 см от нижнего края листа. Нанесли 1,4 мл образца.

Разделение пигментов на одномерной хроматограмме

На одномерной хроматограмме в зависимости от применяемой для разгонки смеси растворителей удается отделить каротин, ксантофиллы и хлорофилл а и в. Интернет-магазин низких цен proteplo-spb.ru. Продажа полотенцесушителей.

Хроматограмму помещают в камеру, заполненную 30 мл смеси, состоящей из бензола и петролейного эфира (2:1). Через 30-40 минут, когда фронт растворителя поднимется на 14 см и будет видно четкое разделение пигментов, хроматограмму вынимают и подсушивают. Самую верхнюю полосу образует каротин, ниже него лежит хлорофилл а, под ним распологаются ксантофиллы, а самый последний – хлорофилл в.

Окрашенные полосы, соответствующие пигментам вырезают, измельчают и переносят в отдельные бюксы на 25 мл. Каротин эллюируется хлороформом, ксантофиллы и хлорофиллы – смесью спирта с ацетоном (1:3).

Растворитель добавляют небольшими порциями, каждый раз настаивая 2-3 минуты.

Эллюция пигментов с бумажного носителя

Эллюцию проводят до полного обесцвечивания бумаги. Элюат фильтруется через стеклянный фильтр или центрифугируется для удаления взвешенных частиц бумаги. Экстракт аккуратно сливают в мерные пробирки и доводят до 5-10 мл в зависимости от интенсивности окрашивания. Полученные экстракты используют для фотоколориметрии с использованием калибровочной кривой, построенной для определенного прибора.

Для получения калибровочных кривых использовали два раствора – раствор Гетри (для зеленых пигментов) и двухромовокислый калий (для желтых пигментов).

Определение оптической плотности пигментов

Оптическую плотность элюата определяют на фотоэлектроколориметре, за синим светофильтром для желтых пигментов и красным для зеленых. Желательно работать в средней области шкалы, где относительная ошибка прибора минимальна.

Оптическая плотность элюата

Д

Хлорофилл а

Хлорофилл в

каротин

0,015

0,01

0,025

Перед тем, как рассчитать содержание пигментов, была построена калибровочная кривая. Использовали раствор известной концентрации 1% CuSO4*5H2O – 25,5 мл; 2%К2Сr2O7 – 50 мл; 7% - NН4ОН (100мл раствора).

Желтые пигменты

разведение

Д

1:0

0,745

1:1

0,35

1:2

0,274

1:3

0,235

1:4

0,19

1:5

0,165

1:6

0,133

Зеленые пигменты

разведение

Д

1:0

0,38

1:1

0,18

1:2

0,12

1:3

0,1

1:4

0,095

1:5

0,08

1:6

0,065

После измерения оптической плотности был построен калибровочный график.

Эквиваленты:

Хлорофилл а – 23,3 мг

Хлорофилл в – 31,5 мг

Каротин – 2,35мг

Виолоксантин – 2,7 мг

По калибровочному графику с помощью оптической плотности элюата нашли концентрации хлорофиллов и каротиноидов. (рис1)

Затем рассчитали содержание пигментов по формуле

Х= (С1*Vэл*Vэк)Vн*Р,

где С1- концентрация пигмента в элюате, определенная по калибровочному графику согласно оптической плотности;

Vэл – объем элюта, мл; Vэк – объем экстракта из навески, мл; Vн – объем раствора, нанесенного на бумагу, мл; Р – навеска в г.

Перейти на страницу:
1 2 3